蛋白marker(电泳图怎么看)
资讯
2023-11-18
147
1. 蛋白marker,电泳图怎么看?
电泳图蛋白质这样看。
1、直接将带条带的凝胶放在凝胶呈像系统中进行定量分析。
2、将所需要的条带剪切下来,用X体积蒸馏水溶解,通过紫外分光光度计在280纳米条件下,测定吸光度值。根据仪器目前标准曲线计算蛋白质浓度,与蒸馏水体积相乘,得到蛋白质质量。
3、如果样品中含有荧光成分,可以进行荧光分析。
2. 为什么marker没转上呢?
解诀方法有2个: 一、加大marker 上样量 二、更换marker
3. 蛋白maker怎么用?
蛋白marker本来就是纯化好的蛋白混合物与染料共价耦联,在跑胶和转膜供我们参考用的,蛋白maker条带在膜上完整,说明蛋白转过去了,其他样品蛋白也一样,所以没什么需要担心的;另外如果你的目标蛋白是大分子,看看你的蛋白胶有没有marker残留,通常大分子比较难转过去,如果蛋白胶上300kDa大小的条带都转到pvdf膜上了,就完全没问题。封闭敷抗体吧。
4. 蛋白质MARKER什么意思?
蛋白分子量标准
蛋白Marker:即蛋白分子量标准,是一些已知分子量的蛋白质的混合物,像“尺子”一样用来指示蛋白质条带的大小。
目前最常用的蛋白Marker分为非预染蛋白Marker、预染蛋白Marker。
非预染蛋白Marker:
是几种已知分子量并纯化好的蛋白质预混液。非预染Marker在电泳过程中看不到,电泳结束后经过蛋白染色后才能起指示作用,无法在实验过程中起预示作用。但是由于蛋白没有附带染料分子或者是标记分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,所以最准确。
预染蛋白Marker:
是纯化好的几种蛋白,通过与染料共价耦联后混合在一起,在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到的一种蛋白Marker。
预染蛋白Marker在电泳过程可以起到预示作用,当观察目标蛋白大小位置进入最佳分辨区时,停止电泳,以得到最佳分辨效果。转膜过程可以监测转膜效率,同时可以在膜上标记蛋白分子量。
但是蛋白分子标记了染料后,由于染料标记效率存在一定的波动,所以各个批次间蛋白 Marker大小可能会存在一定的偏移,也就是预染蛋白Marker条带代表的是相对大小,而不是绝对大小。
5. 电泳maker条带依次大小都是多?
不同品牌的marker条带大小、蛋白量都是不一样的~去找你用的marker的说明书~上面有~
6. mark里需要加染液吗?
现在用预染MAKER,不用加loading buffer的,也不用变性! 未预染marker需要加loading buffer。 loading buffer的功能主要有两个。第一,里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯氰FF起到指示的作用,显示电泳的进程,以便我们适时终止电泳;第二,里边的成分甘油可以加大样品密度,使样品密度大于TAE,从而沉降到点样孔中,防止样品飘出点样孔。另外,有的Buffer是加有SDS的,一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性,因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。细胞裂解后的裂解液,加loading 100℃加热,也是为了中止酶促反应,防止提取的蛋白质降解。
7. 为什么要使用12?
根据目的蛋白的分子量大小选择不同浓度的分离胶,8%、12%和15%三种浓度的分离胶就完全可以搞定日常蛋白的测定。一般测定100kDa分子量以上的蛋白可选择8%浓度的分离胶;测定20kDa分子量以下的蛋白可选择15%浓度的分离胶,中间的分子量可选用12%浓度的分离胶。
有的时候蛋白跑不出来,其实未必是分离胶浓度选的不好,也有可能是marker的问题。marker起到的是蛋白分子量指示剂作用,但是要根据蛋白分子量选择合适的marker。一般的marker分子量范围在10-130kDa之间,都可以满足正常蛋白的需要。
但有些分子量范围较广的marker,比如说6-250kDa,虽然说它范围很广,可中间的蛋白分子量并没有区分的很细,只适用于大分子或小分子蛋白,而对于30-70 kDa的蛋白并不是很适用。
本站涵盖的内容、图片、视频等数据系网络收集,部分未能与原作者取得联系。若涉及版权问题,请联系我们删除!联系邮箱:ynstorm@foxmail.com 谢谢支持!
1. 蛋白marker,电泳图怎么看?
电泳图蛋白质这样看。
1、直接将带条带的凝胶放在凝胶呈像系统中进行定量分析。
2、将所需要的条带剪切下来,用X体积蒸馏水溶解,通过紫外分光光度计在280纳米条件下,测定吸光度值。根据仪器目前标准曲线计算蛋白质浓度,与蒸馏水体积相乘,得到蛋白质质量。
3、如果样品中含有荧光成分,可以进行荧光分析。
2. 为什么marker没转上呢?
解诀方法有2个: 一、加大marker 上样量 二、更换marker
3. 蛋白maker怎么用?
蛋白marker本来就是纯化好的蛋白混合物与染料共价耦联,在跑胶和转膜供我们参考用的,蛋白maker条带在膜上完整,说明蛋白转过去了,其他样品蛋白也一样,所以没什么需要担心的;另外如果你的目标蛋白是大分子,看看你的蛋白胶有没有marker残留,通常大分子比较难转过去,如果蛋白胶上300kDa大小的条带都转到pvdf膜上了,就完全没问题。封闭敷抗体吧。
4. 蛋白质MARKER什么意思?
蛋白分子量标准
蛋白Marker:即蛋白分子量标准,是一些已知分子量的蛋白质的混合物,像“尺子”一样用来指示蛋白质条带的大小。
目前最常用的蛋白Marker分为非预染蛋白Marker、预染蛋白Marker。
非预染蛋白Marker:
是几种已知分子量并纯化好的蛋白质预混液。非预染Marker在电泳过程中看不到,电泳结束后经过蛋白染色后才能起指示作用,无法在实验过程中起预示作用。但是由于蛋白没有附带染料分子或者是标记分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,所以最准确。
预染蛋白Marker:
是纯化好的几种蛋白,通过与染料共价耦联后混合在一起,在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到的一种蛋白Marker。
预染蛋白Marker在电泳过程可以起到预示作用,当观察目标蛋白大小位置进入最佳分辨区时,停止电泳,以得到最佳分辨效果。转膜过程可以监测转膜效率,同时可以在膜上标记蛋白分子量。
但是蛋白分子标记了染料后,由于染料标记效率存在一定的波动,所以各个批次间蛋白 Marker大小可能会存在一定的偏移,也就是预染蛋白Marker条带代表的是相对大小,而不是绝对大小。
5. 电泳maker条带依次大小都是多?
不同品牌的marker条带大小、蛋白量都是不一样的~去找你用的marker的说明书~上面有~
6. mark里需要加染液吗?
现在用预染MAKER,不用加loading buffer的,也不用变性! 未预染marker需要加loading buffer。 loading buffer的功能主要有两个。第一,里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯氰FF起到指示的作用,显示电泳的进程,以便我们适时终止电泳;第二,里边的成分甘油可以加大样品密度,使样品密度大于TAE,从而沉降到点样孔中,防止样品飘出点样孔。另外,有的Buffer是加有SDS的,一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性,因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。细胞裂解后的裂解液,加loading 100℃加热,也是为了中止酶促反应,防止提取的蛋白质降解。
7. 为什么要使用12?
根据目的蛋白的分子量大小选择不同浓度的分离胶,8%、12%和15%三种浓度的分离胶就完全可以搞定日常蛋白的测定。一般测定100kDa分子量以上的蛋白可选择8%浓度的分离胶;测定20kDa分子量以下的蛋白可选择15%浓度的分离胶,中间的分子量可选用12%浓度的分离胶。
有的时候蛋白跑不出来,其实未必是分离胶浓度选的不好,也有可能是marker的问题。marker起到的是蛋白分子量指示剂作用,但是要根据蛋白分子量选择合适的marker。一般的marker分子量范围在10-130kDa之间,都可以满足正常蛋白的需要。
但有些分子量范围较广的marker,比如说6-250kDa,虽然说它范围很广,可中间的蛋白分子量并没有区分的很细,只适用于大分子或小分子蛋白,而对于30-70 kDa的蛋白并不是很适用。
本站涵盖的内容、图片、视频等数据系网络收集,部分未能与原作者取得联系。若涉及版权问题,请联系我们删除!联系邮箱:ynstorm@foxmail.com 谢谢支持!